外泌体的研究方法

去百度文库，查看完整内容>内容来自用户:聚文汇实验新人必读（六）：外泌体实验研究的正确打开姿势！导语最近，外泌体在科研界以迅雷不及掩耳之势火了起来，国自然中标量那是翻着倍的蹭蹭往上涨。然而目前外泌体的研究仍处于初级阶段，首要原因就在于该领域里还木有统一的、简单可行且纯度很高的分离方法，其次对其他囊泡与外泌体的区别仍不能做出清楚的判断。外泌体的藏身之处 正所谓高手在民间，欲一睹高人风采，就必先找到高人隐身之处。通常外泌体藏身于细胞上清、血液、尿液、脑脊液和其他体液。 血液 血液离心后有两种形式：血清和血浆，但不少小伙伴对它们傻傻分不清楚。前者是不经抗凝处理的血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，离心后的上层液体；后者是经抗凝剂处理后，离心出去血细胞所得液体。两者虽然一母同胞，但显然血浆比血清更有内涵，其包含一些纤维蛋白原以及大量的外泌体，因而血浆也更受广大研究者的青睐。Tips:1）血样抗凝剂花样繁多，科研汪们一不小心就会跌的鼻青脸肿。肝素除了会抑制PCR外，还可与外泌体结合阻止细胞摄取外泌体；双嘧达莫（CTAD）则会阻止血小板的激活并抑制其释放外泌体；EDTA可能会干扰PCR反应（尽管其程度小于肝素），但是还是优于其他选择。2）抽血时动作要轻柔迅速，并记录准确的抽血时间。因为秘笈五：qEV法 该方法是利用Size Exclusion Chromatography(SEC)的原理对外泌体进行分离纯化的分离柱，在不损伤外泌体活性的情况下，有效去除样品中杂质蛋白和脂类。

细胞生物学从16世纪启蒙到上世纪70年代电子显微技术出现，其发展大体可以分为四个阶段。细胞生物学其实还是一门非常重要的学科，是在细胞水平上利用物理和生物化学手段，对生命活动进行科学研究，核心问题是遗传与发育的问题。从上世纪50年代以来诺贝尔生理与医学奖大都把奖项给了生物细胞生物学研究方面的科学家。细胞生物学看似简单，但其课程中所涉及的专业面非常广，细胞生物学总体来说算是一个后起的边缘学科，所设计的无机化学，有机化学，形态学，胚胎学，染色体学，分子生物学，生物化学，生理学等内容非常多，越是边缘学科，所涉及的学科门类越多，所以相对来说难度就越大，但是在学习过程中，只要把握重点知识结构，学起来也没那么难。除了专业还有家庭地域个性等重要因素。如果不考虑社会发展的影响，例如弃学从商等，主要考虑在所学专业方面的发展，一般取决于所学专业水平，如学校和导师在同行中的学术地位等。作为一个准备读研的人应该具备研究判断能力，否则还是直接就业好。当然，最主要的还是个人的学习能力和水平，只要能走在前列，无论什么专业前景都是非常美好的

女人，最怕的莫过于衰老。但残酷的是人的衰老是必然的，我们能做到的就是延缓衰老的速度，所以大多数人日常都会十分注重护肤，相信大家最近都有所听闻“外泌体护肤”这个词，那么外泌体护肤你们知道是什么吗？哪个牌子会比较好？一、外泌体护肤是什么？外泌体护肤其实就是利用外泌体成分进行护肤，而外泌体就是动物脐带间充质细胞分泌的一种直径仅为30-15nm的脂质体结构的液体，其中含有许多小分子活性成分，能进到我们皮肤最深处细胞层面改善内环境，激活我们的内源性细胞，达到缓解皮肤衰老的效果。二、外泌体护肤的原理是什么？大家应该都知道我们皮肤衰老的本质就是细胞的凋亡和失活导致的，当我们的新生细胞数量不足以替代衰老细胞数量的时候，已经凋亡的细胞阻挡着营养物质的运输，体内的细胞就会缺少营养导致活力下降，皮肤也会出现松弛下垂、长皱纹、长斑点等衰老现象。外泌体护肤是什么，用什么牌子比较好？那么外泌体护肤正是利用外泌体直径小的特性，能够进入到细胞内部，把包裹在脂质囊泡中的营养信号分子释放出来，是皮肤在细胞间的“通讯员”，能够进行物质和信息的传递。通过传递营养物质和信息，可以激活已经衰老的内源性细胞，让它们重新充满活力，也能修复受损的皮肤屏障，减少自由基的降解，最直接有效的从皮肤细胞层面上改善皮肤的状态，从内至外的解决皮肤衰老的问题。三、哪个牌子外泌体护肤品比较好？明星金莎推荐的CPE，是我国新兴外泌体护肤科技的品牌，专注于抗衰领域，正是运用外泌体护肤的方法，在一上市就成了行业内的黑马，为什么它会成为外泌体护肤产品中的香饽饽呢？DMX_8505当然离不开CPE的灵魂成分外泌体的功效，纳米级直径使其所含的活性成分能够快速渗透吸收到细胞内部，同时还含有抗衰所需的百种活性物质进行输送传递，复配多种小分子活性肽通过“修复、滋养、赋活”三个层次协同作用达到1+1＞2的抗衰功效，从分子层面守护我们的皮肤年轻健康。除此以外，相比其他外泌体护肤的产品，它的另一优势在于外泌体是采用反相乳化包裹技术，因为外泌体中含有很高的生物活性，利用这种技术在外泌体外形成一层保护膜能够提高它的稳定性，也能保持原有的活性应用在CPE的产品中。banner_冻干粉原液_02CPE目前的主打产品是CPE脐带精华冻干原液，同时也是冻龄女神金莎的爱用好物，它的核心成分也是脐带外泌体，坚持使用让我们的皮肤充分吸收活性成分，达到抗衰提升的效果，让我们的肌肤嘭弹润泽！

CPE是一个新锐外泌体抗衰护肤品牌。随着年龄的增长，皮肤内源细胞代谢能力会慢慢变弱，而cpe品牌产品得益于它所含的灵魂成分——外泌体，让我们的护肤不再是仅限于皮肤表皮，而是利用直径足够小的好处能够进到皮肤内部作用于细胞层面，释放携带的营养物质给皮肤的内源细胞，如果有受损的内源细胞还能修护与激活，让它恢复正常运作后，分化出新的皮肤细胞，当皮肤中年轻细胞多了，皮肤也会慢慢变得年轻，从而达到真正抗衰的效果。正是这样从内至外的高科技抗衰护肤方式，在我国是非常稀少的。而cpe护肤品牌占其中一席，备受大家喜爱。

目前卵巢早衰传统干预措施主要包括心理干预、中医干预和西医干预，虽然这些干预方法对卵巢早衰临床症状具有一定缓解作用，但尚无法从根本上有效恢复或保护受损卵巢功能。因此，深入研究其发病机制及开发卵巢早衰防治新策略已成为近年来国内外研究热点。近来研究表明，干细胞因其具有取材容易，对母体创伤小，污染概率低，无免疫原性等优势特点。目前研究者将大鼠进行干细胞移植生成有功能卵母细胞和卵泡细胞，有望从根本上有效干预卵巢早衰这一难题。研究发现，将干细胞通过尾静脉注射到小鼠体内，能明显减少颗粒细胞凋亡，增加卵泡数量，提高雌激素水平，有效恢复卵巢功能，且大部分大鼠能生育幼鼠，其后代生长发育良好。研究还发现，干细胞旁分泌机制刺激颗粒细胞生长发挥干预作用。其通过上调卵巢干细胞功能蛋白如AKR1C18 和 Ly6a(Sca-1)、细胞循环控制蛋白 CD-KN2B 水平促进卵巢再生；通过再次激活宿主卵子或间接调节卵巢微环境减少颗粒细胞凋亡恢复卵巢功能。干细胞可减少环磷酰胺对卵巢组织损伤，甚至还可修复环磷酰胺引起成熟卵泡损伤，部分恢复大鼠卵巢内分泌和生殖功能。干细胞疗法干预卵巢早衰作用机制主要包括：1、通过分泌VEGF、IGF-1 和 HGF抑制次级卵泡和囊状卵泡凋亡促进血管生成；2、通过增加SOD2与过氧化氢酶表达，增强抗氧化和抗凋亡酶基因表达减少细胞凋亡及减轻卵巢氧化损伤；3、通过分泌多种生长因子，逆转环磷酰胺阻断雌二醇和AMH对FSH负反馈作用，阻止生长卵泡过度耗竭从而改善卵泡发育。4、通过分泌外泌体融入顺铂损伤卵巢颗粒细胞，通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，下调促凋亡蛋白Bax表达，减少Caspase-3活化来增加DNA修复酶PARP表达，加速卵巢功能恢复。近年来国内外均有多例不同年龄段卵巢早衰女性运用干细胞疗法干预后诞下健康宝宝报道。所以您可以寻求干细胞疗法来应对卵巢早衰的问题。

比较常见的是干细胞可以治疗白血病。其他的发展方向是因为干细胞可以分化发育成各种器官的细胞，所以可以用来修复损伤，或者培养成成熟的器官之后做移植使用吧

消化系统(digestive system)由消化道和消化腺两大部分组成。消化道：包括口腔、咽、食管、胃、小肠（十二指肠、空肠、回肠）和大肠（盲肠、阑尾、结肠、直肠、肛门）等部。临床上常把口腔到十二指肠的这一段称上消化道，空肠以下的部分称下消化道。消化腺有小消化腺和大消化腺两种。小消化腺散在于消化管各部的管壁内，大消化腺有三对唾液腺（腮腺、下颌下腺、舌下腺）、肝脏和胰脏。消化系统是人体八大系统之一。中文名消化系统外文名alimentary system组成口腔，咽，食道，胃，小、大肠地位人体八大系统之一组成部分消化道和消化腺快速导航基本功能消化系统药理实验其他知识孕妇消化道定义消化系统由消化道和消化腺两部分组成。消化系统消化道是一条起自口腔延续咽、食道、胃、小肠、大肠、到肛门的很长的肌性管道，其中经过的器官包括口腔、咽、食管、胃、小肠（十二指肠、空肠、回肠）及大肠（盲肠、结肠、直肠）等部。消化腺有小消化腺和大消化腺两种。小消化腺散在消化管各部的管壁内，大消化腺有三对唾液腺（腮腺、下颌下腺、舌下腺）、肝脏和胰脏，它们均借助导管，将分泌物排入消化管内。人体共有5个消化腺，分别为：唾液腺（分泌唾液、唾液淀粉酶将淀粉初步分解成麦芽糖）胃腺（分泌胃液、将蛋白质初步分解成多肽）、肝脏（分泌胆汁、储存在胆囊中将大分子的脂肪初步分解成小分子的脂肪

‍‍“超级杂交水稻”技术的发明。美国科学院院长西瑟罗纳，针对“杂交水稻”这一技术的发明，对于世界而言的价值，做出了如下评价:“袁隆平先生发明的杂交水稻技术，为世界粮食安全作出了杰出贡献，增产的粮食每年为世界解决了7000万人吃饭问题…”像这样的科研工作者，也更是我们应该多多关注、学习、宣传弘扬的。‍‍

卵巢早衰(POF)指女性在40岁之前出现以卵巢功能过早衰竭(如月经稀发、闭经、不孕等)为主要临床表现综合征，血清中雌激素水平降低和促性腺激素水平升高为其特征。女性一般在45—55岁之间卵巢功能逐渐衰退，这属正常生理现象。若有女性在40岁之前就发生雌激素水平下降，月经稀发，连续几个月不排卵，极有可能是患卵巢早衰了。甚至有女性在20岁时就被诊断患有卵巢早衰，对于这些女性来讲，不仅会加快衰老，而且生小孩几率微乎其微。一、哪些因素导致女性易患卵巢早衰？1、过度熬夜女性长期熬夜睡眠不足会造成身体内分泌紊乱，从而影响卵巢激素分泌。若卵巢雄性激素分泌过多将引发女性卵巢囊肿和多囊卵巢综合症，使得卵巢早衰症状更加严重。2、过度节食女性为了追求完美身材会选择节食，但过度节食导致女性体内脂肪流失，其实脂肪流失并不是好事，它会使女性卵巢得不到充足养分，卵泡发育受到较大影响，从而引发卵巢早衰。3、压力过大随着现代生活节奏加快，女性承受精神压力过大会影响女性下丘脑垂体的卵巢轴功能，也容易造成女性卵巢早衰。4、抽烟喝酒长期抽烟喝酒女性会影响其内分泌失调，当烟酒中有害物质进入血液后会阻碍卵巢内卵泡的发育，某些致癌物质甚至还会引发卵巢癌，损伤卵巢功能，造成卵巢早衰。5、有家族病史因卵巢早衰与遗传因素有一定的关系，如果有家族病史，女性发病率比正常女性要高。6、免疫因素女性自身免疫失调会造成卵巢功能损伤。7、疾病因素：女性如果患有内分泌疾病，如甲状腺功能异常、类风湿关节炎、半乳糖血症、卵巢肿瘤等。8、物理及化学因素：包括化学药物（紧急避孕药、刚刚装修新房等）、放射性照射和感染。二、为什么患有卵巢早衰后就是不可逆的？卵巢功能衰竭其本质就是卵细胞的耗竭，而卵细胞消耗了就无法再生。因为卵巢里卵的数量是从娘胎里就在开始慢慢减少，在母亲怀孕20周左右，卵巢里有700万到800万的卵，出生之后就100—200万，等到了青舂期卵巢里的卵就只剩30万了。青春期后，女性每次生理期会排出一个卵，但事实是，在排出这个卵同时会凋亡一批卵，直到最后那个成熟的卵被排出来。因此，一旦发生卵巢功能损伤是不可逆的。三、被确诊为卵巢早衰后传统补救方法有哪些？1、雌激素疗法：雌激素疗法是干预卵巢早衰根本方法，它能够缓解因雌激素降低而产生一系列症状，避免生殖器官上皮萎缩与钙的丢失，保护心血管系统，预防脂代谢变化。2、中药或中西药结合干预：常用滋阴降火、补肾活血药配合雌激素，逐步恢复卵巢功能。3、补充均衡营养：因为卵巢早衰都会伴随钙质流失，所以需要适当补钙，而且还需保证每天摄入适当碳水化合物、脂肪和蛋白质，同时还要注意补充维生素。4、坚持锻炼：患有卵巢早衰女性会有更年期一系列症状，易出现骨质疏松、心血管疾病等，所以多锻炼身体有利于预防骨质疏松及心血管疾病。四、患有卵巢早衰如果想生孩子可以治愈吗？虽然卵巢早衰定义年龄是小于40岁女性，但也不乏有部分患者只有20多岁，随着二胎政策放开，如果发生了卵巢早衰，还有生育的机会吗？目前有没有治愈卵巢早衰的好方法？近年来，随着再生医学不断进步，通过干细胞疗法修复卵巢及调理干预卵巢早衰已取令人欣慰良好效果。目前科学家通过干细胞移植动物实验生成有功能卵母细胞和卵泡细胞，有望从根本上干预卵巢早衰这一难题。五、干细胞疗法干预卵巢早衰三种优势1、干细胞促进卵巢再生干细胞通过上调卵巢干细胞功能蛋白如AKR1C18和Ly6a(Sca-1)、细胞循环控制蛋白CD-KN2B 水平促进卵巢再生。2、干细胞恢复卵巢功能干细胞通过激活宿主卵子或间接调节卵巢微环境减少颗粒细胞凋亡恢复卵巢功能。3、恢复卵巢生殖功能干细胞可减少环磷酰胺对卵巢组织损伤，修复环磷酰胺引起成熟卵泡损伤，恢复卵巢内分泌和生殖功能。六、干细胞疗法干预卵巢早衰三种作用机制1、旁分泌：干细胞通过分泌VEGF、IGF-1和HGF抑制次级卵泡和囊状卵泡凋亡，促进血管生成；分泌多种生长因子逆转环磷酰胺阻断雌二醇和AMH对FSH负反馈作用，阻止生长卵泡过度耗竭，从而改善卵泡发育。2、免疫调节：干细胞分泌外泌体融入顺铂损伤卵巢颗粒细胞，通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，下调促凋亡蛋白Bax表达，减少Caspase-3活化，增加DNA修复酶PARP表达，加速卵巢功能恢复。3、高表达：干细胞通过增加SOD2与过氧化氢酶表达，增强抗氧化和抗凋亡酶基因表达，减少细胞凋亡和减轻卵巢氧化损伤。七、临床研究证明干细胞疗法干预卵巢早衰效果良好2015年12月深圳某医院报道了1例因干预白血病患卵巢早衰患者在干细胞移植后8年卵巢功能恢复正常病例。而Lee通过建立环磷酰胺所致卵巢早衰小鼠模型，进一步证实干细胞移植能干预环磷酰胺所致不孕雌性动物模型小鼠。近年来已有多例不同年龄段卵巢早衰女性诞下健康宝宝报道，成果喜人。综上所述，干细胞疗法近年来为卵巢早衰临床干预提供了新策略，并且已在心脏、神经修复、肿瘤防治等方面取得了可喜成果。相信随着干细胞研究逐步深入，它将为疑难杂症干预开拓新的思路。