千秋
BioDev Faster Taq:由普通PCR向快速PCR的革命 一个PCR反应的总耗时取决3335333735于变性、退火、延伸中每一个步骤所需的时间和从一个步骤到下一个步骤的温度变化幅度。现有的快速PCR仪和特殊PCR管等,通过特殊的加温和降温技术,提高温度升降幅度和减少热传导时间,从而缩短PCR过程中PCR变化所需的时间。也有采用特殊试剂促进引物和模板的结合或通过减少反应体积缩短PCR时间的方法。这些方法需要购买特殊的仪器、耗材、试剂,不具有普遍性,而且对PCR的改进受到Taq DNA聚合酶本身扩增性能的限制,缩短PCR反应时间有限,而且会常常会影响到PCR的扩增效率。 博大泰恒公司投入巨大精力研发的快速Taq酶系列——BioDev Faster Taq,将从根本上实现快速PCR。博大公司通过对94 kD普通Taq酶进行精简和优化,同时对部分结构进行定点突变,形成了全新的70 kD DNA聚合酶,Faster Taq在扩增速度、扩增效率、特异性以及酶本身的稳定性都显著优于普通Taq酶,是与现有DNA聚合酶有本质区别的第二代DNA聚合酶。Faster Taq的聚合速度是普通Taq的2-4倍,延伸时间仅为普通Taq酶的1/4,而且由于Faster Taq的高活性和高扩增效率,能有效缩短变性和退火时间,PCR总耗时仅为普通Taq的30%-40%,一般PCR(1-3 kb)均可在30分钟完成。同时PCR的产量,敏感度以及特异性都得到了全面提升。BioDev Faster Taq的研发成功标志着真正意义上快速PCR的诞生。 BioDev Faster Taq聚合速度是常规Taq酶的2-4倍 BioDev Faster Taq是由先进的基因工程技术改造而成的新一代快速Taq酶。由于删除了非必需的蛋白序列,酶结构得到精简和优化,增强了与DNA模板的结合能力,酶分子在模板上的移动速度和聚合dNTP的速度都大幅提高。普通Taq酶的延伸速度一般为1 kb/1 min,Faster Taq的延伸速度为1 kb/10-15 sec,最快可达1 kb/5 sec,使延伸时间缩短为普通Taq的1/4。Faster Taq的比活性和扩增效率显著高于普通Taq酶,可以缩短变性和退火时间,进一步减少PCR时间。如图1所示,Faster Taq扩增3 kb片段仅需38分钟,扩增8 kb片段仅需66 分钟,节约时间70%以上。 图1 Faster Taq可节约70%以上时间 Faster Taq的扩增速度来自其自身的优越结构。在相同条件下扩增5 kb片段,在延伸时间为5分钟时,所有的Taq酶都能扩增出目的条带,而Faster Taq(SF/GF-Taq)的产量明显优于其它Taq酶。当延伸时间为2分30秒时,其它Taq酶的产量明显下降,Faster Taq的扩增效果不受影响。当延伸时间为1分30秒时,其它Taq酶已不能扩增出目的条带,Faster Taq的产量没有明显变化(图2)。Faster Taq的内在性质决定了它拥有超快的聚合速度和更高的扩增效率。这种高速PCR可以在任何PCR仪上实现,无需使用特殊耗材和特殊试剂盒,无需添加仪器和设备,也不会影响下游实验。 图2 Faster Taq延伸速度明显快于普通Taq酶。Faster Taq(SF/GF-Taq)在相同反应体系中扩增5 kb片段,94℃ 20s,55℃ 2s,25个循环,延伸时间见图所示。当延伸时间缩短至1m30s时,只有Faster Taq能扩增出目的条带,显示出Faster Taq的速度优势。 酶结构的优化使Faster Taq的稳定性显著优于普通Taq酶 Faster Taq的蛋白结构经过精心优化,进行了删除突变和对关键位点的点突变,不仅使酶的扩增速度和扩增效率大幅提高,而且使酶的稳定性显著增加,耐热性较普通Taq酶明显加强。普通Taq酶的热半衰期为95℃ 1.6小时,Faster Taq为100℃ 2.5小时,95℃ 10.5小时。实验显示,Faster Taq的扩增效率在100℃加热1小时后没有明显变化,而普通Taq酶100℃加热1小时后已经没有活性(图3)。优秀的耐热性能为设计和优化PCR程序提供了广阔的空间。在扩增低拷贝模板时可以增加循环数至45圈,在扩增高GC含量或有复杂二级结构的模板时,可以将变性温度提高至96℃,确保充分变性。Faster Taq的高耐热性不仅使Faster Taq更加稳定,而且使Faster Taq对复杂模板的扩增能力显著提高。 Faster Taq的稳定性还体现在对反复冻融的抵抗力上。实验显示在经过反复冻融30次后,Faster Taq活性人没有明显变化,而其它的Taq酶都已经没有活性(图4)。这种高稳定性降低了酶在运送和保存时对环境的要求,保持长时间质量稳定,并且稳定的活性也保证了PCR的可重复性和不同时间反应的可比较性。 图3 Faster Taq与普通Taq 热稳定性实验。Faster Taq与普通Taq在加热前后扩增相同的DNA片段,所有反应条件均保持不变。100℃加热1小时后只有Faster Taq仍保持活性,表明Faster Taq的热稳定性明显优于普通Taq酶。 图4 Faster Taq可耐30次以上反复冻融。将Faster Taq premix液与普通Taq premix液在-20℃与室温之间反复冻融,在冻融前,冻容15次和30次分别取样做PCR电泳,结果如图所示。Faster Taq在冻融30次后仍有活性,显示Faster Taq的稳定性显著优于普通Taq酶。 BioDev Faster Taq系列可全面满足PCR实验需求 为了充分满足各种类型的PCR实验需要,博大泰恒公司以快速Taq酶技术为核心研发了一系列的Faster Taq。Silver Faster Taq是没有3’-5’外切酶活性的快速Taq酶,扩增时会在片段末端加上一个A,可用于一般PCR反应和T载体克隆。Gold Faster Taq具有3’-5’外切酶活性,其错配率为10-8,保真性与Pfu DNA聚合酶相当,是目前市场上保真性最高的DNA聚合酶之一,并且具备Faster Taq系列快速、高效、高稳定性的优点,是进行基因克隆测序,突变等高保真实验的理想工具。博大泰恒公司即将推出超高保真Taq酶(HSF-Taq),错配率在10-9-10-10之间,能完全胜任大规模测序、分子遗传学研究、SNP筛查等高精确的研究。 博大泰恒公司以先进的混合酶技术研发的Long Faster Taq,专为扩增长片段研制,可以轻松扩增10 kb以上的DNA片段,配合超长扩增缓冲液,扩增长度可达20-40 kb,完全解决PCR长片段扩增的难题。 上述各种快速Taq酶都即将推出热启动产品,届时Faster Taq系列将全面解决各种PCR扩增难题。 新一代超级抗生素来自大麻 据意大利和英国的科学家报道,大麻里的某些未知成分具有杀死抗超级耐药菌(耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌)的潜能,且不易产生耐药性。 Cell:干细胞分化259个基因控制 鳄鱼泪腺防御素可成新型生物抗生素1.西方最新基因研究成果证明女人给了男人智慧 西谚曰:摇纺车的手统治着世界。这句话入木三分地概括了社会生活中的男女关系。从生物遗传进化角度看,女人的确给了男人智慧。据北京科技报报道,关于基因的最新研究成果证实了这一点。 人们观察发现,男女两性的智商有许多奇怪的差异。男性的智商范围稍大,他们的智力低下者和天才都要比女性多一些。早在30多年前,这些智商测定的结果就引起了一些研究人员的注意,美国明尼苏达州立医院的罗伯特·莱尔克推论说,决定智力的基因大多数集中在女性的X染体上。如今德国一个研究小组正在证明这一推论的正确性。他们的研究结果证明X染色体在人的智力上扮演着中心角色。由于人类的女性祖先重智力而轻相貌和体力,最终创造了人类不可思议的大脑,它们擅长于数学和物理,并以艺术、音乐和文学作为娱乐。 性选择影响进化的观念最早可以追溯到达尔文。他认为在配偶时雌性的选择可以解释一些奇特的现象,比如,雄孔雀的尾巴和雄狮的鬃毛不仅不能帮助它们更好地生存,还可能招致杀生之难,却没有被进化掉,而只是因为能够获得异性的青睐而特别地保留了下来。 新的研究表明,X染色体在性选择中具有特殊的作用。人类的23对染色体中只有一对染色体是性染色体,它们决定着人的性别。女性拥有一对X染色体,而男性拥有XY各一条染色体。由于染色体配对存在,在任何常染色体上的基因都是一对,但是由于男人的性染色体上只有一条X染色体,其上的任何基因就只是单个。这便是性选择的魔力和结果,也成为人类大脑进化的基础。当遗传突变导致一种使个体更为成功的特质产生时,它可以从男性唯一的X染色体上的基因表达出来,因为在男性的另一条Y染色体上没有与X染色体相对应的基因配对以抵消或遮蔽它。 随着女性不断选择聪明的男性,突变的基因就会在那个人群中很快变得普通起来。最终由于该基因的普及,不断增加的女性成员就会具有成双的突变基因,并因此而把突变特点(如聪明)表达出来。所以这一基因突变的传递模式是,由女性主要负担传递的任务,而在男性后代身上首先体现出基因突变的特点来(男性先变得更聪明一些),然后普及到众多的男女后代。2.蚊子爱咬你 基因来决定 最新研究发现,如果蚊子总爱选择你下口,那么错不在你,而在你的父母,因为无论是招蚊子咬,还是对蚊子叮咬产生严重反应都是由基因决定的。 澳大利亚昆士兰医学研究所的流行病学者尼克?马丁在研究了成千上万个蚊子和500对孪生子后发现,在蚊子叮咬和身体对叮咬起严重反应的情况中,85%是由基因决定的。长相相像的孪生子因为具有相同的基因,他们对蚊子叮咬的反应相同;而那些只有一半基因相同所以长相有差异的孪生子,对蚊子叮咬产生相同反应的可能性只有50%。 3.基因实现神话 绿叶变成鲜花 随着基因科学的逐步发展,原本只有在神话传说中才可以看到的变绿叶为鲜花的情形,现在可以在现实生活中得以实现了。 这一具有历史意义的发现是由美国和墨西哥科学家共同完成的,他们通过一系列的基因实验获得了成功。他们发现一种芥子植物的所有基因中有五个是负责花瓣的生成的,而它们的生长基础与叶子完全相同。科学家们把叶子中的相关基因进行了改变,把整个叶子也变成了花瓣。研究者认为这一技术将为植物种植业带来丰厚的利润,种植花卉的人们可以随意把花卉变成不同的漂亮式样。 4.只需一滴水 基因助防伪 只需滴上一滴水,商标便会发生生物反应,商品真伪立即可辨。如果要仿冒这项技术,其代价是投资 1亿美元,还得由一流专家历时两年才有可能破译其生物配方。这便是原华西医科大学的访美学者、生物基因工程专家李光武教授最近研制的生物基因防伪技术。 据介绍,这种奇特的生物基因防伪商标形如白纸,可反应生物藏在“纸”的夹层里,你只需将一滴普通的水涂在商标上,1到3分钟以后,商标就会发生生物反应,生物分子会按照预先设定的模式运动,形成明显的防伪图案,真伪立即可辨,十分简便。也可使用特制的防伪标准液,此时,生物分子会发生另一种运动,可更加准确地识别产品的真伪,这也是该商标的二级防伪功能。据称,目前这种防伪技术在世界上处于领先地位