南京建成生物工程研究所

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　　大鼠急性肾脏缺血再灌注后处理动物模型的建立　　【摘要】 目的：建立肾脏缺血后处理动物模型. 方法：将40只SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组（IR组）和3个缺血后处理组（IPO1，IPO2，IPO3组），分别制作动物模型. IR组在同时夹闭双侧肾动脉45 min后恢复血供，IPO1，IPO2和IPO3组在肾缺血45 min后分别采用不同的后处理方法，其中IPO3组采用反复10次再灌注20 s-缺血20 s的后处理方法. 恢复血供24 h后留取各组大鼠静脉血标本及肾组织，检测肾功能指标，光镜下观察肾组织形态学变化并对肾小管损伤程度进行评分. 结果：IPO3组血尿素氮为（27.9±3.2） mmol/L，血肌酐为（232±49） μmol/L，肾小管损伤程度评分为382±48. 和IR组相比，IPO3组的血尿素氮、血肌酐及肾小管损伤程度评分均明显降低（P<0.01），肾组织损伤明显减轻，其余两个缺血后处理组与IR组相比差异无统计学意义（P>0.05）. 结论：在急性肾脏缺血后，采用IPO3组的方法可以减轻急性肾脏缺血再灌注损伤，从而成功建立大鼠急性肾脏IRI的后处理动物模型.　　【关键词】 缺血后处理　　0引言　　急性肾脏缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，IRI）是一种常见的临床病理生理过程，多见于低血容量性休克、急性肾动脉阻断以及肾脏移植等情况，可以造成急性肾衰竭或使移植肾功能延迟恢复. 因此，如何有效防止因急性肾脏IRI而导致的各种急慢性肾脏疾病是一个亟待解决的问题. 2000年，陶凌等［1］在国内首先证实了缺血后处理（ischemic postconditioning，IPO）对急性心肌缺血再灌注兔心脏具有保护作用，此后，研究者［2-4］把研究对象拓宽到不同物种和不同器官，建立了IPO动物模型，并对IPO保护作用机制进行了探讨. 但是，肾脏IPO是否同样具有对急性肾脏IRI的保护作用尚不清楚. 我们在大鼠急性肾脏IRI模型基础上，探讨建立肾脏IPO大鼠模型的方法.　　1材料和方法　　1.1材料健康雌性SD大鼠40只，体质量（236±10）g（第四军医大学实验动物中心），动物许可证号SCXK（军2002005），标准饲料喂养，正常饮水，普通光照. 血尿素氮、血肌酐试剂盒（化学法）（南京建成生物工程研究所）；721分光光度计（上海精密科学仪器公司）；光学显微镜（日本Olympus公司）.　　1.2方法　　1.2.1动物分组与模型制作将SD大鼠随机分为5组，每组8只. ①缺血再灌注组（IR组）：参考Basile等［5］的方法进行双侧肾脏缺血再灌注，建立缺血再灌注引起的急性肾衰竭的动物模型. 将大鼠用30g/L戊巴比妥腹腔注射麻醉，去毛、固定，沿上腹部正中线逐层切开皮肤、腹直肌及腹膜，先后在结肠脾区及结肠肝区位置暴露左、右肾，游离左、右肾蒂，用玻璃分针小心分离出左、右肾动脉，然后用血管夹同时将双侧肾动脉夹闭，45 min后同时松开双侧血管夹，恢复双侧肾脏血供. ②缺血后处理1组（IPO1组）：各缺血后处理组的手术方法基本同IR组. 在缺血45 min后用血管夹同时给予双侧肾脏反复5次的恢复血供3 min-阻断血供3 min处理（即缺血后处理），再恢复血供. ③缺血后处理2组（IPO2组）：在缺血45 min后用血管夹同时给予双侧肾脏反复5次的恢复血供20 s-阻断血供20 s处理，再恢复血供. ④缺血后处理3组（IPO3组）：在缺血45 min后用血管夹同时给予双侧肾脏反复10次的恢复血供20 s-阻断血供20 s处理，再恢复血供. ⑤对照组（S组）：手术方法基本同IR组，但仅分离出大鼠双侧肾动脉，不进行夹闭.　　1.2.2标本留取在末次恢复肾脏血供24 h后将大鼠用30 g/L戊巴比妥腹腔注射麻醉，固定，分离下腔静脉，用注射器采血2～3 mL，用于血液生化指标检查；然后用冰生理盐水经肾动脉对肾脏进行灌注直至肾脏发白，取下双肾，留取部分组织做光镜检查.　　1.2.3指标观察①肾功能：采用化学比色法检测血尿素氮及血肌酐. ②肾脏组织形态学：部分肾组织用100 mL/L甲醛固定，常规脱水、包埋、切片后，行HE和PAS染色，光镜下观察形态，参考Paller等［6］的方法进行评分，每只大鼠肾组织随机选择10个无重叠视野（×200），每个视野下随机选择10处肾小管，共按100个肾小管计分，分数越高表示肾小管损伤程度越严重.　　统计学处理：所得数据采用x±s表示，采用完全随机设计的单因素方差分析（ANOVA），多组之间的两两比较采用LSDt检验，应用SPSS 13.0软件进行统计学处理，以P<0.05为差异有统计学意义.　　2结果　　2.1血尿素氮及肌酐与S组相比， IR， IPO1， IPO2， IPO3组的血尿素氮及血肌酐均显著增高（P<0.01）. 与IR组相比，IPO1组的血尿素氮和血肌酐略有增高、IPO2组略有降低，但均无统计学意义（P>0.05），IPO3组的血尿素氮和血肌酐均明显降低，差异有统计学意义（P<0.01，表1）.　　表1各组SD大鼠血尿素氮、血肌酐及肾小管损伤程度评分的比较（略）　　2.2肾脏组织形态学的变化　　2.2.1肾小管损伤程度的评分与S组相比，IR，IPO1，IPO2，IPO3组的肾小管损伤程度差异有统计学意义（P<0.01）. 与IR组相比，IPO1组的肾小管损伤程度更重（P<0.05），IPO2组的肾小管损伤程度略轻，但无统计学意义（P>0.05），IPO3组的肾小管损伤程度明显减轻（P<0.01，表1）.　　2.2.2肾脏组织形态学改变在光镜下S组大鼠肾组织结构正常，肾小管、肾间质未见明显病理改变（图1A）. 经过再灌注24 h后，IR组大鼠肾组织中可见间质水肿，肾小管上皮细胞刷状缘消失，大量上皮细胞脱落、坏死，基底膜裸露，管腔明显扩张，管腔内可见大量管型（图1B）. IPO3组大鼠肾组织中可见间质轻度水肿，肾小管上皮细胞扁平，部分刷状缘脱落消失，部分管腔扩张，可见少量管型，相对IR组病理改变明显减轻（图1C）.　　图1各组SD大鼠肾脏形态学改变PAS ×200　略　　3讨论　　1986年，Murry等［7］发现在急性缺血再灌注出现之前对心脏进行反复多次的短暂缺血再灌注（即缺血预处理）可以减轻心脏的IRI，此后，Islam等［8］证实了预处理对肾脏急性IRI同样有保护作用. 然而在临床中，如果一旦发生IRI，则预处理难以实施，因此，研究在缺血后对再灌注进行处理更具有实用价值. 2000年，我国学者［1］首先证实了IPO对急性心肌IRI具有保护作用，此后，Zhao等［2］和Kin等［9］的研究分别证明了IPO可以减轻犬和大鼠心脏IRI. 不仅在心脏，随后的一些研究针对肝脏［3］、脑［4］等组织进行IPO，证实对其相应器官的IRI也可产生保护作用，并对保护作用机制进行了探讨. 但是，以往的国内外众多研究并未涉及到肾脏器官，而且针对大鼠心脏等器官的研究中，单次后处理的时间和后处理的循环次数也不尽相同［10］，因此，在开展针对肾脏IPO作用效果及作用机制的研究之前，首先需要建立成功的大鼠肾脏IPO模型.　　在国外许多大鼠缺血再灌注的急性肾衰模型研究［5, 11］中，都将肾脏缺血时间限定在45 min，我们在本研究中同样将缺血时间限定在45 min，通过预实验成功复制了大鼠急性肾脏IRI模型. Yang等［12］通过对研究发现，如果在开始再灌注10 min后再进行后处理将丧失对IRI的保护作用，的研究［9,13］发现，如果在开始再灌注1 min之后再进行后处理，同样会使其对心肌IRI的保护作用丧失. 最近，Tang等［10］的研究显示，不同的后处理循环次数和心肌梗死面积有关，单次后处理时间过长、后处理循环次数过少都有可能限制其心肌保护作用的发挥. 因此，我们在成功复制了大鼠急性肾脏IRI模型的基础上，重点针对单次后处理的时间和后处理的循环次数进行了研究，以期成功建立大鼠急性肾脏IRI的后处理动物模型.　　我们在实验中对大鼠肾脏缺血后采用了3种不同的后处理方式，从功能学和形态学角度对后处理的效果进行了分析，以便选择合适的肾脏缺血后处理动物模型. 结果显示，相对于IR组，采用反复5次恢复血供3 min-阻断血供3 min的后处理（IPO1组）并不能减轻急性肾脏IRI，反而可能加重损伤；采用反复5次恢复血供20 s-阻断血供20 s的后处理（IPO2组）能使肾功能指标改善，但无统计学意义. 而采用反复10次恢复血供20 s-阻断血供20 s的后处理组（IPO3组）和IR组相比，肾功能指标明显改善，肾组织中未见肾小管上皮细胞脱落和基底膜裸露，间质水肿、刷状缘消失、管腔扩张、管型等改变也较IR组轻，对肾小管损伤程度评分的分析同样支持上述结果.　　综上所述，在急性肾脏缺血后及时采取反复10次的短暂（恢复血供20 s-阻断血供20 s）后处理，可以减轻急性肾脏IRI，从而成功建立大鼠急性肾脏IRI的后处理动物模型，为进一步研究IPO对大鼠肾脏的保护作用机制奠定了基础.　　【参考文献】　　［1］ 陶凌, 李源, 高峰,等. 缺血后处理对急性心肌缺血再灌注兔心脏的保护作用［J］. 第四军医大学学报, 2000, 21(6): S116-S118.　　［2］ Zhao ZQ, Corvera JS, Halkos ME, et al. Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning ring reperfusion: comparison with ischemic preconditioning［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2003, 285(2):H579-H588.　　［3］ Sun K, Liu ZS, Sun Q. Role of mitochondria in cell apoptosis ring hepatic ischemiareperfusion injury and protective effect of ischemic postconditioning［J］. World J Gastroenterol, 2004, 10(13): 1934-1938.　　［4］ Danielisova V, Nemethova M, Gottlieb M, et al. The Changes in Endogenous Antioxidant Enzyme Activity After Postconditioning［J］. Cell Mol Neurobiol, 2006, 26(78):1179-1189.　　［5］ Basile DP, Donohoe D, Cao X, et al. Resistance to ischemic acute renal failure in the Brown Norway rat: a new model to study cytoprotection［J］. Kidney Int, 2004, 65(6):2201-2211.　　［6］ Paller MS, Hoidal JR, Ferris TF. Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure in the rat［J］. J Clin Invest, 1984, 74(4): 1156-1164.　　［7］ Murry CE, Jennings RB, Reimer KA. Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium［J］. Circulation, 1986, 74(5):1124-1136.　　［8］ Islam CF, Mathie RT, Dinneen MD, et al. Ischaemiareperfusion injury in the rat kidney: the effect of preconditioning［J］. Br J Urol, 1997, 79(6):842-847.　　［9］ Kin H, Zhao ZQ, Sun HY, et al. Postconditioning attenuates myocardial ischemiareperfusion injury by inhibiting events in the early minutes of reperfusion［J］. Cardiovasc Res, 2004, 62(1):74-85.　　［10］ Tang XL, Sato H, Tiwari S, et al. Cardioprotection by postconditioning in conscious rats is limited to coronary occlusions <45 minutes［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2006, 291(5): H2308-H2317.　　［11］ Spandou E, Tsouchnikas I, Karkavelas G, et al. Erythropoietin attenuates renal injury in experimental acute renal failure ischaemic/reperfusion model［J］. Nephrol Dial Transplant, 2006, 21(2): 330-336.　　［12］ Yang XM, Proctor JB, Cui L, et al. Multiple, brief coronary occlusions ring early reperfusion protect rabbit hearts by targeting cell signaling pathways［J］. J Am Coll Cardiol, 2004, 44(5):1103-1110.　　［13］ Philipp S, Downey JM, Cohen MV. Postconditioning must be initiated in less than 1 minute following reperfusion and is dependent on adenosine receptors and PI3kinase［J］. Circulation, 2004, 110(Suppl III):804.

甘草甲醇提取物FM100对小鼠溃疡性结肠炎的药效学研究【摘要】 目的 观察甘草甲醇提取物FM100对小鼠溃疡性结肠炎的作用。方法 用三硝基苯磺酸钠（TNBS）和乙醇制造小鼠溃疡性结肠炎模型，空白对照组和TNBS模型组灌胃等容量生理盐水，阳性对照组灌胃地塞米松0.2 mg/kg，FM100大、中、小剂量组分别灌胃FM100 300 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg,连续灌胃14 d。观察小鼠体质量变化、腹泻、结肠黏膜组织形态学、脾脏指数及髓过氧化物酶(MPO)活力等指标。结果 甘草甲醇提取物FM100可不同程度地改善TNBS/乙醇所致溃疡性结肠炎小鼠体质量下降和腹泻症状，明显降低结肠黏膜粘连及其溃疡分值和脾脏指数，但可增高MPO活力（P<0.05或P<0.01）。结论 甘草甲醇提取物FM100对小鼠溃疡性结肠炎有较好的改善作用，能减轻结肠局部的病理性损伤。 【关键词】 甘草甲醇提取物FM100；溃疡性结肠炎；小鼠 Abstract:Objective To investigate the effects of methanol extract of Glycyrrhizae FM100 on ulcerative colitis (UC) mice. Methods A mouse model of UC were made by TNBS and alcohol. The blank control group and model group were given NS, the positive group was taken 0.2 mg/kg Dexamethasone, FM100 large, middle, small groups were taken 300 mg/kg, 200 mg/kg, 100 mg/kg FM100 separately for 14 days. Observed body weight, diarrhea, histomorphology of colon mucosa, spleen index and myeloperoxidase (MPO) activity. Results Methanol extract of Glycyrrhizae FM100 could improve in different degrees the decreased body weight and diarrhea symptom, decreased the colon mucosa adhesion, ulcer grade and spleen index, increased the MPO activity. Conclusion FM100 can improve the UC of mice, alleviated the pathologic injure in partial colon. Key words: methanol extract of Glycyrrhizae FM100; UC; mouse 溃疡性结肠炎（uicerative colitis，UC）是以腹泻、黏液脓血便、腹痛和里急后重为主要症状，以结肠黏膜慢性炎症和溃疡为病理特点的一种消化道疾病，近年来发病率呈上升的趋势，临床缺乏有效的治疗手段和药物。有文献报道甘草甲醇提取物FM100具有抗消化性溃疡的作用[1],但对UC有无疗效尚未见报道。本实验研究观察了甘草甲醇提取物FM100（含甘草甜素较少的精制部分）对小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用，为临床用药提供实验依据。 1 实验材料 1.1药品与试剂 甘草甲醇提取物FM100，参考文献[2]方法制备；地塞米松片，国药准字H33020822，浙江仙琼制药有限公司生产，批号：040904；三硝基苯磺酸钠（TNBS），天津市福晨化学试剂生产厂生产，批号：20041112；髓过氧化物酶（MPO）试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20050428。 1.2 实验仪器 UV-9100型紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器公司生产；BS110sartorius电子天平，北京赛多里斯有限公司生产；HH.S11-2型水浴锅，北京长安科学仪器厂生产。 1.3 实验动物 昆明种小鼠，体质量（20±2）g，雌雄兼用，购自兰州生物制品研究所，合格证号：医动用字14-001。 2 方法及结果 2.1造模和给药[3,4] 小鼠按性别、体质量随机分为空白对照组，TNBS模型组，阳性对照组，甘草甲醇提取物FM100大、中、小剂量组。空白对照组和TNBS模型组灌胃等容量生理盐水，阳性对照组灌胃地塞米松0.2 mg/kg，FM100大、中、小剂量组分别灌胃FM100300 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg。各组每天给药1次，连续给药14 d。 第1 d给药后1 h，乙醚轻度麻醉小鼠，用直径2 mm灌肠器（蘸取少量液体石蜡）从肛门插入结肠约4 cm处灌肠造模。其中空白对照组灌肠 NS 0.1 mL/只；TNBS模型组，阳性对照组，FM100大、中、小剂量组灌肠2 % TNBS（用50 %乙醇作溶媒）0.1 mL/只。第7 d，空白对照组灌肠NS 0.1 mL/只，其余各组灌肠1 % TNBS（用50 %乙醇作溶媒）0.1 mL/只。 2.2统计学分析 采用SPSS10.0统计软件包分析，实验数据用(±s)表示,组间比较采用t检验。 2.3观察指标及结果 2.3.1FM100对TNBS所致UC小鼠体质量的影响 分别于造模前及造模后隔日称小鼠体质量，观察各组小鼠体质量变化，结果见表1。表1FM100对TNBS所致UC小鼠体质量的影响（略）注：与空白对照组比较#P<0.05, ##P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01结果显示，TNBS和乙醇灌肠形成溃疡性结肠炎后小鼠体质量增长缓慢,随着病程的延长，体质量逐渐下降（P<0.05或P<0.01）；阳性对照组和FM100大、中、小剂量组(除第12 d FM100小剂量组)小鼠体质量的增长明显快于TNBS模型组（P<0.05或P<0.01）；但阳性对照组,FM100大、中、小剂量组组间小鼠体质量的变化均无统计意义(P>0.05)。 2.3.2FM100对TNBS所致UC小鼠腹泻和粪便隐血的影响 第7 d，各组灌肠4 h后，参照文献[5]自拟以下标准对粪便进行分值评价：0分，正常粪便；1分，软粪便；2分，无定形软便；3分，水样或脓样便。结果见表2。表2FM100对TNBS所致UC小鼠腹泻的影响(略) 注：与空白对照组比较#P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01 结果显示，除空白对照组外，各组小鼠灌肠后4 h时出现明显的腹泻症状（P<0.01）,多为软便或无定形粪便,也可见水样或脓血样粪便；按粪便性状评估,阳性对照组和FM100大、小剂量组可明显改善UC小鼠腹泻症状（P<0.05或P<0.01）；但阳性对照组,FM100大、中、小剂量组组间比较均无统计意义。 小鼠灌肠后4 h，采用联苯胺法检测各组小鼠粪便隐血[6]。结果显示，TNBS模型组小鼠粪便隐血反应呈强阳性（深蓝色）,空白对照组隐血呈阴性（浅黄色）,FM100中剂量、小剂量组和阳性对照组个别小鼠粪便隐血呈阳性（蓝色）,但其程度弱于TNBS模型组，表明给药组小鼠结肠出血性损伤明显低于TNBS模型组。 2.3.3 FM100对TNBS所致UC小鼠组织损伤形态学影响 造模第14 d，禁食（不禁水）12 h后处死小鼠，取肛门上约4 cm的一段结肠，放大镜下观察结肠黏膜损伤情况，参照表3标准进行评分，计算各组总分值（总分值=腹腔粘连分值+结肠溃疡及炎症分值）；然后测量结肠自然长度及负荷长度（负荷重量2 g）,用负荷长度增加值比自然长度的百分比表示结肠弹性。结果见表4。表3腹腔粘连及结肠溃疡评分标准分值腹腔粘连情况（略）表4 FM100对TNBS所致UC小鼠结肠组织形态学的影响(略)注：与空白对照组比较#P<0.05, ##P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01 结果显示，TNBS诱发溃疡性结肠炎后,小鼠结肠粘连,肠壁红肿增厚,弹性下降,有溃疡、出血点和穿孔等现象，粘连及溃疡评分分值明显增高（P<0.01），结肠弹性明显下降（P<0.05）；FM100大、中、小剂量组能明显改善小鼠结肠粘连及溃疡（P<0.05或P<0.01）；FM100大剂量组能明显增强小鼠结肠弹性（P<0.01），FM100中、小剂量组及阳性对照组小鼠结肠弹性具有一定的增强趋势，但无统计意义。阳性对照组,FM100大、中、小剂量组组间小鼠结肠粘连及溃疡评价分值的变化和结肠弹性的增加均无统计意义。 2.3.4 FM100对TNBS所致UC小鼠结肠MPO活力的影响 将2.3.3中观察后的4 cm结肠称重，按1∶19加匀浆介质制成5 %的组织匀浆，按试剂盒说明书检测并计算MPO活力。结果见表5。表5FM100对TNBS所致UC小鼠结肠MPO活力和脾脏指数的影响(略)注：与空白对照组比较#P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01；与阳性对照组比较△P<0.05,△△P<0.01；与FM100大剂量组比较★P<0.05 2.3.5 FM100对TNBS所致UC小鼠脾脏指数的影响 造模14 d处死小鼠，分离脾脏，滤纸吸去血液并称重，计算脾脏指数（脾重/体质量×100 %）。结果见表5。 结果显示，造模组小鼠脾脏明显增大（P<0.01）；FM100大、小剂量及阳性对照药明显降低小鼠脾脏指数（P<0.05或P<0.01），但是，阳性对照组,FM100大、小剂量组组间小鼠脾脏指数的变化均无统计意义；阳性对照药显著降低MPO活力（P<0.01），FM100中、小剂量增高MPO活力（P<0.05或P<0.01），且呈剂量依赖性。 3讨论 本实验采用的TNBS/乙醇诱发小鼠实验性UC模型与临床上溃疡性结肠炎的病理改变极为相似，乙醇破坏了肠道黏膜屏障,TNBS为一种半抗原,与组织蛋白结合为一种抗原物质,使T淋巴细胞致敏,诱发自身免疫反应,从而导致肠道炎症的发生。造模后动物出现了体质量减轻、腹泻、便血等症状和腹腔粘连、结肠溃疡出血甚至穿孔等病理变化。连续给药14 d后结肠黏膜充血水肿、出血和溃疡的发生明显减轻,表明FM100具有对抗TNBS所致的炎性病理损害的作用；给药组动物肠管弹性升高，表明FM100对炎性渗出有抑制作用，给药组动物腹泻、便血等较轻,且体质量增加,表明FM100能改善UC小鼠的病理状态。MPO主要存在于中性粒细胞内嗜苯胺盐颗粒中,其局部活力的增高可以反映中性粒细胞浸润的程度，急性炎症期出现的炎性细胞浸润以中性粒细胞为主，TNBS/乙醇诱发小鼠溃疡性结肠炎的急性期,结肠组织MPO活力增高,地塞米松对照组MPO含量显著低于模型对照组,表明地塞米松具有对抗炎性细胞浸润的作用，但是FM100各给药组MPO活力明显增高，我们认为，这可能与甘草甲醇提取物FM100所含的化学成分有关，甘草甲醇提取物FM100是含甘草甜素较少的甲醇浸膏的精制组分，富集各种黄酮、异黄酮类化合物，其抗溃疡作用的主要成分有甘草苷、甘草素、异甘草苷等[1]，由此，我们推论，甘草所含的黄酮类及异黄酮类化合物不一定具有对抗炎性细胞浸润的作用，其具体作用机理还有待于进一步实验研究。

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药用部分：松油脂及松香、叶、根、茎节、嫩叶（俗称树心）等入药。用 途：性味苦、温、无毒。能祛风湿，活血祛愈，止痛，止血首批国家科技津贴获得者、中国马尾松研究专家朱德俊经过几十年悉心研究，发现了天然的马尾松松花粉在世界上独一无二的药用价值。松花粉是唯一含有 200 多种活性营养成分、且完全付合人体需求的保健珍品，被营养学家喻为“微型营养库”，同时也是目前世界上发现的唯一全营养食品，长期食用可达到生理平衡，提高免疫力。 松花粉是唯一荣获“国际特别荣誉－对人类突出贡献奖（此奖在国际上悬挂了 18 年，而只有象发明了电灯这样类似的贡献才有资格获此殊荣）”的保健珍品。（据朱教授介绍，世界上的松树种类很多，但并非各地的松树花粉均可食用，而中国以马尾松为代表的松花粉却得天独厚，可以食用，一旦经过深加工，社会财富可增加十几倍）。松花酒是以松花粉和精白糯米为主要原料，辅以药食兼用的枸杞子、桑椹等，采用传统发酵工艺精酿而成，是一种营养丰富的养生美酒。松花酒酒体丰满，绵甜醇厚，可使饮用者在陶然杯中的同时，获得进补养生的愉悦 。马尾松的松花粉可提高人的耸果体素的分泌，人的松果体素是人体大脑中松果体分泌的一种活性物质，随着年龄增长其分泌量逐渐减少。松果体素分泌量的减少正是导致人体衰老、免疫力下降、失眠症等疾患的重要因素。松果体素能有效调节和维持人体内环境的平衡稳定，而且安全可靠，无毒副作用，无依赖性。试验表明，马尾松的松花粉与松果体素的完美配伍与协同作用，可显著提高其生物利用率和功效的发挥。据报道：马尾松树皮提取物含抗氧化剂活性氧嫩抑制人癌细胞株，用化学比色法对嵩珍营养源研究所“膜分离法”制备的马尾松树皮提取物进行抗氧化活性的体外测定，并用不同浓度的马尾松树皮提取物处理体外培养的人体8种癌细胞株检测其对癌细胞生长的影响结果报告如下：马尾松树皮提取物(广东嵩珍营养源研究所膜分离法制备马尾松树皮，经筛选烘干和粉碎后用纯水加热浸提浸提液，经粗滤离心分离和微滤后，除去悬浮物和大分子杂质再用中空纤维膜超滤得到含有前花青素等生物活性成分的透过液，透过液用卷式纳滤膜浓缩去除糖类无机盐等小分子杂质和大部分水后经干燥制得松树皮生物活性物质提取物)抗氧化检测试剂盒活性氧检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。试验后证明马尾松树皮提取物(PMBE)在体外的抗氧化能力和清除活性氧能力，结果显示我国PMBE的抗氧化能力介于VC和VE之间在给定浓度范围内最高抗氧化能力是VC的0.90倍约为VE的3.5倍具有较强的抗氧化和清除活性氧能力，且有良好的量效关系。表明它是一种较强的抗氧化剂和活性氧自由基清除剂，其在生理盐水中的较强活性提示其用于食品添加剂和药物研发的可行性。基于法国海松树皮提取物Pycnogenol(r)的生理作用，提示马尾松树皮提取物可能也具有增强免疫力抗疲劳和延缓衰老等功效的潜在药用价值。又据中国农业大学报道：马尾松树皮提取物能在体外抑制人大肠癌细胞生长，马尾松树皮提取物(PMBE)具有抑癌生长作用，利用构建PMBE的动物药理模型，该项目的研究是通过细胞培养、细胞活力检测（MTT实验）及计算机模拟评估马尾松树皮提取物(PMBE)抑制体外培养人大肠癌LoVo细胞生长规律，建立了马尾松树皮提取物(PMBE)、胎牛血清（FBS）及处理时间（t）三因素对LoVo细胞生长抑制率的反应模型，利用该回归模型对三因素优化组合，同时就各因素单独效应及其互作效应进行了探讨。PMBE、FBS、t三因素适量水平搭配（0、1、0）可提高对LoVo的生长抑制效率，最高可达0.42，即三因子用量分别为140 μg/mL、15%、48 h时效果最佳。系列数据分析结果表明，在体外处理细胞过程中可能存在抑制物效应报酬递减规律，且试验体系中多因素综合效应呈现随机非线性特点。该研究是统计学在医学科研设计、衡量和评价(D.M.E)领域的一次尝试，可为构建PMBE的动物药理模型确定药用剂量提供参考。另外，马尾松的药用主要用于制造养鱼业治疗鱼病的药物，其浸出液可以治疗鱼的烂头病、烂鳃病等。另外据报道：寄生于马尾松或赤松的根部为植物多孔菌科茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的菌核，可制做：1，茯苓皮：茯苓菌核的外皮，功能利水肿； 2，赤茯苓：削去外皮后的淡红色部分，功能渗利湿热； 3，白茯苓：切去赤茯苓后的白色部分，亦称茯苓，切成小方块，功能渗湿健脾； 4，茯神：白茯苓中心抱有细松根者，切成方形薄片，功能宁心安神。许多茯苓制品都具有抗肿瘤作用。　　你好，松油脂及松香、叶、根、茎节、嫩叶（俗称树心）等入药。　　用途：性味苦、温、无毒。能祛风湿，活血祛愈，止痛，止血。

评估159例慢性前列腺炎病人经直肠射频热疗的疗效，并探讨治疗前后病人前列腺液、精液中活性氧的变化。方法：159例慢性前列腺炎病人按就诊顺序分为3组：药物组（54例）、热疗组（53例）、联合组（52例）。根据NIH慢性前列腺炎分类将慢性前列腺炎分为II型（46例）、IIIa型（47例）、IIIb型（66例）。药物组给予坦索罗新0.2mg、po、qd,克拉霉素0.25、po、bid，疗程6周；热疗组给予经直肠射频热疗60min（温度40-43℃）、 qd,疗程5天。我们采用NIH-CPSI评分评价经直肠射频热疗的疗效，精液MDA含量采用硫代巴比妥酸法检测，NO、SOD含量采用专门ELISA试剂盒检测（购自南京建成生物工程研究所），锌离子含量采用原子分光光度法检测。结果：各组治疗前后NIH-CPSI均有显著性差异（P<0.01）,热疗组与药物组比较有显著性差异（P<0.01）；热疗组在治疗Ⅲa和Ⅲb与药物组有显著性差异（ P<0.01）。热疗组和联合组与药物组相比，可明显提高Zn2+浓度（P<0.01）。热疗组和联合组的MDA、NO和SOD变化与药物组相比均具有显著性差异（P<0.01 P<0.05，P<0.05）。偏相关分析表明， SOD与排尿症状呈负相关（r=-0.510,p=0.027）。结论：综上所述，经过射频热疗治疗后，CP患者表现出临床症状可不同程度的缓解，尤其是Ⅱ和Ⅲa型病人。其主要原因就是前列腺局部微环境的改善，其中活性氧自由基MDA、SOD、 NO在这一过程起了重要作用。

1 材料和方法 1.1动物和材料 健康SD大鼠，雌雄不拘，体重180-240g（锦州医学院实验动物中心提供,动物合格证号[2000]038）。博莱霉素（商品名：博莱平阳Bleomycin，BLMA5）：批号000505，哈尔滨博莱制药有限公司生产。羟脯氨酸（HYP）试剂盒：购自南京建成生物工程研究所。 1.2实验方法 1.2.1实验分组 体重180-240克的健康SD大鼠60只，雌雄不拘，随机分为正常对照组和模型组。每组30只，对照组一次性气管内注入生理盐水0.1mL.100g-1，模型组按5mg.kg-1体重注入等容积BLMA5，所有动物于1、3、7、14、28d各处死6只，观察肺纤维化形成的病理变化。 1.2.2动物模型的复制 乙醚麻醉大鼠，将其仰卧固定于大白鼠实验台上，切开颈部皮肤，分离气管，用1mL注射器缓慢注入BLMA55mg.kg-1。注药后将动物直立并旋转，使药物在肺内均匀分布。尔后缝合皮肤，置动物于实验室内喂养。 1.2.3 病理标本取材及处理 乙醚麻醉大鼠，断头处死，完整分离出气管和肺，迅速于右下肺钳取多块1mm3肺组织薄片，放于3%戊二醛溶液中，按电镜常规进行标本制备。取左肺浸泡于10%中性甲醛溶液中，按体视学方法制备标本。取右肺余肺1g加入9mL0.86%冷生理盐水做肺组织匀浆，留取上清液，于-70℃冰箱保存，按试剂盒说明书步骤进行HYP的统一测定。 1.2.4 光镜标本制作、观察和体视学测量：将左肺浸泡于10%中性甲醛溶液固定24小时后，从肺尖至肺底每隔3mm将肺脏横切成6-12块薄片，10%中性甲醛溶液继续固定72小时，乙醇梯度脱水，香柏油透明，石蜡定向包埋，连续切片，厚度6m，选择每块标本的连续切片中第10片，HE染色，进行定性定量观察。每张切片观察5个视野，即肺上下左右四个固定视野，肺中部一个视野，在10倍物镜下，应用方网格测试系统（由丹麦Aarhus大学提供），借助CIAS-1000型细胞图像分析系统（北京大恒图像视觉分析系统提供）以点记数法[4]测算下列参数：肺泡体密度 (volume proportion of alveolar air, Vva)，肺间质体密度 (volume proportion of interinterstitial, Vvi)，肺血管体密度（volume proportion of capillary, Vvc）(其中Vvc参照系为肺间质)，分别取其平均值。再将每只大鼠的各个组织块取平均值。 1.3统计学处理:统计数据以SPSS10.0软件进行分析，组间比较采用配对t检验。

南京建成生物工程研究所位于风景优美的玄武湖畔，拥有一支由病理版学专家、海外留学归权国博士、主任技师等高级技术人才组成的科研团队，素质高，技术精，长期进行相关学科的研究，有成熟的技术和丰富的经验，致力于开发生物工程、医疗器械类创新高科技产品...